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儀器介紹

實驗目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

實驗概述：

在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使培養(yǎng)的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數(shù)目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。

應(yīng)用范圍

應(yīng)用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

畸變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養(yǎng)

選擇合適細胞系，在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。

2）受試物處理

設(shè)置多個濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑制濃度）

陽性對照

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝活化系統(tǒng)（S9混合液）

模擬體內(nèi)代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4.）采樣時間

短期處理:1個細胞周期（通常24小時，含或不含S9）

長期處理:覆蓋多個細胞周期（如48小時）

5）染色體制備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋酸=3:1）后滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀器與試劑

關(guān)鍵儀器：

培養(yǎng)箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析系統(tǒng)）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑:

細胞培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。